#BiologyMonday, Pada artikel kali ini kami akan memaparkan prinsip dasar dari teknik analisis biokimia yang sangat penting, yaitu Western Blot (WB). Western Blot adalah teknik analisis biokimia yang digunakan untuk mendeteksi keberadaan, ukuran, dan kelimpahan protein tertentu dalam sampel. Artinya, teknik ini berdasarkan pada prinsip interaksi antigen-antibodi. Metode ini memainkan peran kunci dalam pemahaman kita tentang protein seluler dan memungkinkan para peneliti untuk mengidentifikasi, mengukur, dan memahami interaksi protein yang kompleks.
Prinsip dasar dari Western Blot dan langkah-langkah utamanya
1. Ekstraksi Protein Seluler
Langkah pertama dalam Western Blot adalah mengekstraksi protein seluler dari campuran kompleks protein intraseluler dan ekstraseluler. Ini dapat melibatkan jaringan, sel, atau bahan biologis lainnya. Proses ini bertujuan untuk mendapatkan sampel yang mewakili sebanyak mungkin protein yang ada.
2. Kuantifikasi dan Elektroforesis
Setelah ekstraksi, langkah selanjutnya melibatkan kuantifikasi konsentrasi protein dan pemisahan elektroforesis protein dalam matriks gel. Ini memungkinkan pemisahan protein berdasarkan ukuran dan muatan listriknya, menciptakan pola pita unik yang mencerminkan keberagaman protein dalam sampel.
3. Transfer ke Membran
Pita protein yang dipisahkan kemudian di-transfer ke membran dengan afinitas tinggi terhadap protein. Hal ini memungkinkan protein berpindah dari gel ke membran, menciptakan representasi yang lebih stabil dan dapat diatasi untuk langkah-langkah berikutnya.
4. Pemblokiran Membran
Sebelum mendeteksi protein tertentu, membran “diblokir” untuk mengurangi pengikatan nonspesifik. Ini dilakukan dengan memperkenalkan substansi (biasanya protein seperti albumin) ke membran untuk menutupi situs pengikatan yang tidak spesifik.
5. Deteksi Antigen
Langkah penting selanjutnya adalah mendeteksi antigen, yaitu protein yang ingin diidentifikasi. Ini dilakukan dengan menggunakan antibodi yang spesifik untuk protein tersebut. Antibodi ini berinteraksi dengan protein yang dicari dan membentuk kompleks antigen-antibodi yang dapat dideteksi.
6. Inkubasi dengan Antibodi Sekunder
Selanjutnya ialah menginkubasi membran dengan antibodi sekunder yang terhubung ke label, seperti kemiluminesen atau fluoresensi. Langkah ini memperkuat sinyal dan memfasilitasi deteksi protein dengan lebih efektif.
7. Pengembangan dan Deteksi Sinyal
Kemudian kita perlu melakukan proses pengembangan untuk menghasilkan sinyal yang dapat terdeteksi. Sinyal ini seharusnya secara teoretis sebanding dengan derajat pengikatan antigen-antibodi yang terjadi selama langkah sebelumnya.
8. Kuantifikasi dengan Densitometri
Langkah terakhir melibatkan kuantifikasi pita yang dihasilkan menggunakan perangkat lunak densitometri. Ini memungkinkan peneliti untuk mengukur intensitas pita, yang dapat dihubungkan dengan jumlah relatif protein dalam sampel. Lebih lanjut, anda dapat melihat infografik berikut ini.
Prinsip Dasar Western Blot dalam Analisis, Gambar dari onlinelibrary.wiley
Kesimpulan Materi
Western Blot adalah teknik yang sangat efektif dalam memahami ekspresi protein, interaksi protein, dan dinamika seluler. Dengan memahami prinsip-prinsip dasar teknik ini, para peneliti dapat memberikan kontribusi besar dalam penelitian biokimia dan pemahaman fundamental tentang biologi seluler.
Advisains dapat memfasilitasi diskusi lebih lanjut mengenai product Western Blot. Sampaikan Kebutuhan Riset Anda Tim advisor spesialis kami sangat antusias mendukung keberhasilan riset dan aplikasi rutin Anda. Maka, jangan ragu untuk chat sekarang (+62 817 9154 607/info@advisains.id).
Baca juga: Sistem Elektroforesis Flatbed untuk Penelitian Biologi Molekuler
